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Benzonase Nuclease 全能核酸酶

2017-06-22

                  ---------核酸克星,DNA消消消!RNA消消消!




在CO-IP、蛋白提取或純化實驗中,很多時候,您的樣本都有不同程度的核酸污染,不注意便會出現各種各樣的問題,如跑膠后背景高、蛋白樣本粘度高、蛋白產量低等。


今天,我們為您推薦Benzonase Nuclease 全能核酸酶----適用于去除蛋白質產品中的核酸污染、降低黏度、提高產量,它比超聲更徹底!比DNase/RNase酶更霸道!妥妥的為您排憂解難!

 


應用:


◆       蛋白提取時去除核酸污染:在重組蛋白純化或哺乳動物細胞裂解物下游要求粘度較低的情況下,可以利用Benzonase核酸酶降低樣品粘度以利操作,提高蛋白質產量;

◆       有效減少存放的外周血單細胞(PBMC)的結塊現象;

◆       有利于不可溶性蛋白復性前,高質量包涵體制備;

◆       有效去除帶負電荷的核酸對雙向SDS-PAGE蛋白樣品的影響;

◆       可以用于蛋白抽提、蛋白純化、Western Blot、免疫沉淀等實驗。


簡介:

全能核酸酶Benzonase Nuclease是來源于Serratia Marcescens 經過基因工程改造的核酸酶。

它能夠在非常廣泛的條件下(6M urea, 0.1 M Guanidine HCl, 0.4% Triton X100, 0.1% SDS, 1 mM EDTA, 1 mM PMSF), 降解所有形式的(雙鏈,單鏈,線狀,環狀)DNA和RNA。其活力比DNaseI強34倍,能以相同的效率酶切單鏈和雙鏈DNA和RNA,將核酸完全消化成3-8個堿基長度的5'-單磷酸寡核苷酸。

全能核酸酶適用于去除蛋白質產品中的污染,符合FDA關于核酸污染去除的規程。


特點:

★Benzonase可以與多種細胞細菌裂解液配合使用,去除粗提物中的核酸,降低溶液粘性,提高蛋白質產量;

★本公司全能核酸酶經特殊工藝表達純化,無蛋白酶、內毒素污染,沒有標簽,方便下游實驗操作;

★在IP實驗中,在使用Protein A+G Sepharose Beads的同時,加入benzonase對去除核酸污染效果更佳;

★純度>99%;

★活性遠高于進口品牌產品。

 

(使用benzonase后,蛋白粘度明顯降低)


優勢:

去除核酸的方式也有很多,如:超聲法、DNase/RNase酶法,全能核酸酶相比這兩種最常用的方法到底有什么區別呢?




超聲法

DNase/RNase酶法

Benzonase全能核酸酶

相似處

可以破碎細胞或者組織

DNase酶消化DNA

RNase酶消化RNA

Benzonase可以消化所有DNA和RNA

優勢

利用剪切力可在一定程度上降解核酸

利用核酸內切酶活性,可在溫和條件下,較好的消化核酸

一種酶即可降解所有形式的DNA和RNA,將DNA和RNA消化成3-8個堿基的單磷核苷酸;

可降低蛋白粘性、降低背景、提高蛋白產量;

目的蛋白被核酸包裹,只能使用benzonase將核酸消化,才能將蛋白釋放;

benzonase可以在低溫下消化,不會降解目的蛋白;

極高的穩定性,可以與多種細胞細菌裂解液配合使用,去除粗提物中的核酸。

缺陷

1、 超聲只能打碎為大片段;

2、 處理完樣品很多還是很粘稠,不易吸取上樣;

3、 若目的蛋白被核酸包裹,無法使用超聲方法;

4、 即使在冰上操作,也會產熱,易降解熱敏感的蛋白;

5、 機械操作隨機性強,難評估核酸清除的有效性。

特定酶消化特定核酸,操作繁瑣、重復性差

親,還沒發現呢^_^~^_^


實驗圖片:



價格:

貨號

規格

包裝規格

市場指導價(元)



RPE002-50

25KU

50ul

625


RPE002-200

100KU

200ul

2000


RPE002-1000

500KU

1000ul

7500




其他品牌價格對比:

品牌

規格

價格

七海生物

25KU(500U/ul)

625元

Sigma

5KU(≥250 U/μL)

643.5元

Merck

10KU(25-29 U/ul)

1670元



常見問題:


Q:組織樣品如何處理

A:將30~100mg動物或植物組織研磨充分后,加入100~200μL裂解液,同時加入1~5μL全能核酸酶,室溫孵育30min,收集裂解液,離心取上清即可進行下游實驗。


Q:大腸桿菌或其他細菌如何處理

A:細菌離心收集后,用裂解液或者研磨破碎后,每100μL加入1~5μL全能核酸酶,室溫孵育30min,收集裂解液,離心取上清即可進行下游實驗。


Q:如何稀釋

A:正常建議稀釋比例(終濃度)為1:1000~1:20000,其中時間、溫度、稀釋比例為影響反應的正面因素。


Q:稀釋后每次用多少量,如何試梯度?起始加多少?

A:看不同的實驗要求,添加量可以按照1:100-1:10000之間。真核細胞需要量比原核細胞量高,因為真核細胞中核酸含量高真核細胞起始添加量可以按照1:1000的比例添加,原核細胞可以按照1:10000的比例添加;4℃消化DNA添加量比室溫消化DNA添加比例高,因為室溫下Benzonase酶活力更高。普通Co-IP實驗,蛋白質表達實驗可以適當稍加,對DNA殘留要求高的實驗,可以按照1:100的比例添加。


Q:反應緩沖液

A:常用生物緩沖液,如TBS、MOPS(pH6-8)等。


Q:怎樣滅活Benzonase核酸酶?如何去除?

A:采用EDTA螯合金屬離子會可逆地抑制Benzonase核酸酶活性,極端條件會造成不可逆失活,例如:100mM NaOH,70℃處理30min等。Benzonase核酸酶可采用陰離子交換柱或氣相色譜法從目的產物中分離出去,由于這種核酸內切酶及其穩定,建議在終產物要求排除核酸酶的應用中不要使用Benzonase核酸酶。


Q:Benzonase 核酸酶與蛋白酶抑制劑混合物可以兼容嗎

A:Benzonase 核酸酶與蛋白酶抑制劑混合物是可以兼容,但是對于含有EDTA配方的蛋白酶抑制劑混合物要特別小心,EDTA濃度大于1mM時會抑制Benzonase 的活性。



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